OBJETIVO: Identificar o genótipo do vírus do sarampo em três viajantes suspeitos de infecção por sarampo. MÉTODOS: Amostras (sangue e urina) foram coletadas para sorologia, isolamento viral e genotipagem. As sorologias para pesquisa de IgM para o vírus do sarampo e da rubéola foi realizada utilizando-se o kit de ELISA (Siemens - Marburg, Alemanha). As amostras clínicas (linfócito e urina) foram inoculadas na SIRC (Statens Serum Institute rabbit corneal epithelial cell line-ATCC CL 60) e nas células Vero Slam. O RNA foi extraído das amostras clínicas e das células inoculadas e processadas por PCR, utilizando oligonucleotideos específicos para sarampo e rubéola. RESULTADOS: Todos os pacientes apresentaram sorologia IgM negativa para sarampo e positivo para rubéola. Os vírus da rubéola isolados dos pacientes que vieram da Finlândia, Peru e Alemanha pertencem aos genótipos 1B, 1C e 1E, respectivamente. O genótipo 1B foi encontrado na Europa e na costa oriental da América do Sul, o genótipo 1C foi encontrado no Peru e na costa oeste da América do Sul e o genótipo 1E, identificado pela primeira vez em 1997, agora aparenta ser um genótipo com distribuição mundial. CONCLUSÃO: O conhecimento dos genótipos de sarampo e rubéola que circulam em São Paulo é essencial para o controle do sarampo, rubéola e síndrome da rubéola congênita.

OBJECTIVE: To identify measles virus genotypes in three cases of travelers suspected of measles infection. METHODS: Samples (blood and urine) were collected for serology, virus isolation, and genotyping. Sera were analyzed for IgM antibodies against measles virus and rubella virus by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (Siemens - Marburg, Germany). Clinical samples (lymphocytes and urine) were inoculated into Statens Serum Institute rabbit corneal epithelial cell line- ATCC CL 60 (SIRC) and Vero Slam cells. RNA was extracted from clinical samples and cell culture was inoculated and processed by polymerase chain reaction (PCR) with oligonucleotides specific for measles virus (MV) and rubella virus (RV). RESULTS: All patients showed IgM negative serology for MV and positive IgM for RV. RV belonging to genotypes 1B, 1C, and 1E were isolated from patients who came from Finland, Peru, and Germany, respectively. Genotype 1B has been found in Europe and on the East Coast of South America; 1C has been found in Peru and the West Coast of South America, and 1E, first identified in 1997, now appears to have worldwide distribution. CONCLUSION: Information about RV and MV genotypes circulating in São Paulo is essential for the control of measles, rubella, and congenital rubella syndrome (CRS) in Brazil.

O presente estudo descreve o isolamento e o crescimento do vírus selvagem da rubéola na linhagem celular RC-IAL. A susceptibilidade da linhagem celular RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz) para o vírus-padrão da rubéola RA 27/3 foi anteriormente descrito por nós(4). Amostras de 20 pacientes com suspeita de infecção por rubéola foram testadas por sorologia, isolamento viral e nested PCR. Os soros foram testados por Elisa para detecção de anticorpos reagentes para rubéola e nested PCR para detectar o RNA viral. As amostras clínicas de sangue, urina, fragmento de placenta e líquido amniótico foram inoculadas nas linhagens celulares RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz) e Sirc (córnea de coelho). O vírus da rubéola foi isolado das amostras clínicas de quatorze pacientes. O efeito citopático (ECP) foi examinado por microscopia de contraste de fase, e o RNA do vírus da rubéola foi amplificado por nested PCR. Os resultados obtidos mostram que a linhagem celular RC-IAL é um excelente substrato para isolamento do vírus da rubéola. Estes dados são importantes, pois poucas linhagens descritas na literatura apresentam efeito citopático que possibilite seu uso para isolar o vírus da rubéola de material clínico.

The present study describes the isolation and growth the wild-type rubella virus in RC-IAL. The susceptibility of a rabbit kidney (RC-IAL) to the RV RA 27/3 strain was previously reported by us(4). Samples of 20 patients with suspected cases of rubella infection were tested by serology, virus isolation and nested PCR. The sera were tested by Elisa for the detection of rubella virus antibodies and nested PCR assay was performed to detect RNA virus. The samples of urine, blood, fragments of placenta and amniotic fluid were inoculated in the RC-IAL (rabbit kidney, Institute Adolfo Lutz) and Sirc (rabbit cornea) cell lines. Rubella virus was isolated in samples from 14 of the patients. The CPE (cytopathic effect) was visualized by phase contrast and RV RNA was amplified by nested PCR.The results obtained showed that the cellular lineage RC-IAL is an excellent substratum for isolation of the rubella virus. These findings are important since this is one the few cell lines described in literature that presents a cytopathic effect, so that it can be used to isolate the virus of the clinical specimens.

Este trabalho descreve o rápido crescimento do vírus da rubéola em amostras clínicas em cultura primária de fibrocondrócitos com desenvolvimento de efeito citopático em resposta a infecção pelo vírus da rubéola. As células foram isoladas do menisco do joelho do coelho após extração enzimática e incubadas a 37°C em meio DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino. Seis amostras clínicas de urina, sangue e liquor foram inoculadas na cultura primária de fibrocondrócitos e na linhagem Vero. As células de fibrocondrócitos apresentaram efeito citopático após 24 horas de incubação e o vírus foi detectado por imunoistoquímica e Nested PCR. As células infectadas apresentaram aspecto arredondado, com formação de alguns prolongamentos citoplasmáticos e sincícios, produzindo células multinucleadas. A curva de crescimento da infecciosidade do vírus foi mais alta quando comparada com a linhagem celular Vero.

This study describes the rapid growth of the rubella virus in samples of a primary fibrochondrocyte cell culture with the development of a cytopathic effect (CPE), in response to infection by the rubella virus. The cells were isolated from the meniscus joint of a rabbit after enzymatic extraction and incubated at 37°C with a Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), supplemented with 10% fetal calf serum. A total of six clinical samples from urine, blood and cerebrospinal fluid were inoculated in the fibrochondrocyte and the cell lines of the African green monkey kidney - ATCC CCL-81 (Vero). The fibrochondrocyte cell showed CPE after 24 hours and virus growth was confirmed by immunohistochemistry and Nested PCR. The cells inoculated with samples were examined by phase contrast microscopy and showed characteristic rounding, along with bipolar and multipolar cells. The infection curve increased during the five days of observation, showing that the titers in fibrochondrocyte cells were then higher than those observed in Vero cell lines.

OBJETIVO: O diagnóstico diferencial de doenças exantemáticas causadas por vírus é geralmente difícil, e equívocos não são raros, especialmente depois da introdução da vacina contra o sarampo e a rubéola. Um estudo laboratorial foi conduzido com o objetivo de estabelecer o diagnóstico etiológico de casos de exantema em crianças que receberam a vacina contra o sarampo. MÉTODOS: Soros de casos de exantema em crianças que receberam vacina contra o sarampo, em 1999, foram analisados para anticorpos IgM contra os vírus do sarampo, da rubéola e do parvovírus humano B19 (HPV B19), por técnicas comerciais de Elisa, e o herpes vírus humano tipo 6 (HHV 6), por técnica comercial de imunofluorecência. A viremia para cada um desses vírus foi testada pela reação em cadeia da polimerase (PCR). RESULTADOS: Foram notificados, em 1999, 17 casos de crianças com exantema pós-vacinal. A idade das crianças era de nove a 12 meses (mediana, dez meses). Uma amostra de sangue colhida para investigação laboratorial foi obtida para cada criança. O tempo decorrido entre a aplicação da vacina e o aparecimento do exantema variou de um a 60 dias. Os resultados da sorologia das 17 crianças sugeriram o seguinte diagnóstico etiológico para o exantema: 17,6% (três em 17) infecção pelo HPV B19; 76,5% (13 em 17) infecção pelo HHV 6; 5,9% (um em 17) exantema originado pela vacina do sarampo. CONCLUSÃO: Os resultados indicaram que a infecção pelo HPV B19 ou pelo HHV 6 pode ser diagnosticada como sarampo de origem vacinal. Portanto, é fundamental incluir esses vírus no diagnóstico laboratorial para corretamente apontar a etiologia das doenças exantemáticas, evitando, assim, atribuir à vacina do sarampo efeito colateral.

OBJECTIVE: The clinical differential diagnosis of rash due to viral infections is often difficult, and misdiagnosis is not rare, especially after the introduction of measles and rubella vaccination. A study to determine the etiological diagnosis of exanthema was carried out in a group of children after measles vaccination. METHODS: Sera collected from children with rash who received measles vaccine were reported in 1999. They were analyzed for IgM antibodies against measles virus, rubella virus, human parvovirus B19 (HPV B19) using ELISA commercial techniques, and human herpes virus 6 (HHV 6) using immunofluorescence commercial technique. Viremia for each of those viruses was tested using a polimerase chain reaction (PCR). RESULTS: A total of 17 cases of children with exanthema after measles immunization were reported in 1999. The children, aged 9 to 12 months (median 10 months), had a blood sample taken for laboratory analysis. The time between vaccination and the first rash signs varied from 1 to 60 days. The serological results of those 17 children suspected of measles or rubella infection showed the following etiological diagnosis: 17.6% (3 in 17) HPV B19 infection; 76.5% (13 in 17) HHV 6 infection; 5.9% (1 in 17) rash due to measles vaccine. CONCLUSIONS: The study data indicate that infection due to HPV B19 or HHV 6 can be misdiagnosed as exanthema due to measles vaccination. Therefore, it is important to better characterize the etiology of rash in order to avoid attributing it incorrectly to measles vaccine.

OBJETIVO: O diagnóstico diferencial de doenças exantemáticas causadas por vírus é geralmente difícil, e equívocos não são raros, especialmente depois da introdução da vacina contra o sarampo e a rubéola. Um estudo laboratorial foi conduzido com o objetivo de estabelecer o diagnóstico etiológico de casos de exantema em crianças que receberam a vacina contra o sarampo. MÉTODOS: Soros de casos de exantema em crianças que receberam vacina contra o sarampo, em 1999, foram analisados para anticorpos IgM contra os vírus do sarampo, da rubéola e do parvovírus humano B19 (HPV B19), por técnicas comerciais de Elisa, e o herpes vírus humano tipo 6 (HHV 6), por técnica comercial de imunofluorecência. A viremia para cada um desses vírus foi testada pela reação em cadeia da polimerase (PCR). RESULTADOS: Foram notificados, em 1999, 17 casos de crianças com exantema pós-vacinal. A idade das crianças era de nove a 12 meses (mediana, dez meses). Uma amostra de sangue colhida para investigação laboratorial foi obtida para cada criança. O tempo decorrido entre a aplicação da vacina e o aparecimento do exantema variou de um a 60 dias. Os resultados da sorologia das 17 crianças sugeriram o seguinte diagnóstico etiológico para o exantema: 17,6% (três em 17) infecção pelo HPV B19; 76,5% (13 em 17) infecção pelo HHV 6; 5,9% (um em 17) exantema originado pela vacina do sarampo. CONCLUSÃO: Os resultados indicaram que a infecção pelo HPV B19 ou pelo HHV 6 pode ser diagnosticada como sarampo de origem vacinal. Portanto, é fundamental incluir esses vírus no diagnóstico laboratorial para corretamente apontar a etiologia das doenças exantemáticas, evitando, assim, atribuir à vacina do sarampo efeito colateral.

OBJECTIVE: The clinical differential diagnosis of rash due to viral infections is often difficult, and misdiagnosis is not rare, especially after the introduction of measles and rubella vaccination. A study to determine the etiological diagnosis of exanthema was carried out in a group of children after measles vaccination. METHODS: Sera collected from children with rash who received measles vaccine were reported in 1999. They were analyzed for IgM antibodies against measles virus, rubella virus, human parvovirus B19 (HPV B19) using ELISA commercial techniques, and human herpes virus 6 (HHV 6) using immunofluorescence commercial technique. Viremia for each of those viruses was tested using a polimerase chain reaction (PCR). RESULTS: A total of 17 cases of children with exanthema after measles immunization were reported in 1999. The children, aged 9 to 12 months (median 10 months), had a blood sample taken for laboratory analysis. The time between vaccination and the first rash signs varied from 1 to 60 days. The serological results of those 17 children suspected of measles or rubella infection showed the following etiological diagnosis: 17.6% (3 in 17) HPV B19 infection; 76.5% (13 in 17) HHV 6 infection; 5.9% (1 in 17) rash due to measles vaccine. CONCLUSIONS: The study data indicate that infection due to HPV B19 or HHV 6 can be misdiagnosed as exanthema due to measles vaccination. Therefore, it is important to better characterize the etiology of rash in order to avoid attributing it incorrectly to measles vaccine.

OBJETIVO: Descreve-se o crescimento do vírus-padrão da rubéola RA-27/3 na linhagem celular RC-IAL, com desenvolvimento de efeito citopático em resposta à infecção viral. Para este propósito, o vírus-padrão foi titulado simultaneamente nas linhagens celulares Vero, SIRC e RK13. MÉTODOS: O vírus-padrão da rubéola RA-27/3 foi inoculado na linhagem celular RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz). Placas contendo 1,5x10(5) células/ml foram inoculadas com 0,1 ml do vírus contendo 1x10(4) DICT50/0,1 ml. O efeito citopático correspondente a 25% foi observado após 48 h e 100% após 96 h. Os resultados obtidos foram comparados com o crescimento do vírus nas linhagens celulares SIRC, Vero e RK13. O vírus da rubéola na linhagem celular RC-IAL foi detectado por imuno-histoquímica. RESULTADOS: As células inoculadas com o vírus da rubéola apresentaram efeito citopático nas primeiras 48h. As células apresentaram aspecto arredondado, com formação de alguns prolongamentos citoplasmáticos e sincícios, produzindo células multinucleadas. A curva do crescimento da infectividade do vírus foi praticamente a mesma que a observada nas outras linhagens celulares. CONCLUSÃO: Os resultados obtidos mostram que a linhagem celular RC-IAL é um ótimo substrato para crescimento do vírus da rubéola, pois poucas linhagens celulares descritas na literatura apresentam efeito citopático considerável e podem ser utilizadas para preparação de antígenos e nos testes de diagnóstico sorológico para o vírus da rubéola.

OBJECTIVE: The rapid growth of the rubella virus in RC-IAL² with development of cytopathic effect, in response to rubella virus infection, is described. For purposes of comparison, the rubella virus RA-27/3 strain was titered simultaneously in the RC-IAL, Vero, SIRC and RK13 cell lines. METHODS: Rubella virus RA-27/3 strain are inoculated in the RC-IAL cell line (rabbit Kidney, Institute Adolfo Lutz). Plates containing 1.5x10(5) cells/ml of RC-IAL line were inoculated with 0.1ml s RA-27/3 strain virus containing 1x 10(4)TCID50/0.1ml. A 25% cytopathic effect was observed after 48 hours and 100% after 96 hours. The results obtained were compared to those observed with the SIRC, Vero and RK13 cell lines. Rubella virus was detected by immunohistochemistry. RESULTS: With the results, it was possible to conclude that the RC-IAL cell line is a very good substrate for culturing rubella virus. The cells inoculated with rubella virus were examined by phase contrast microscopy and showed the characteristic rounded, bipolar and multipolar cells. The CPE in RC-IAL was observed in the first 48 hours and the curve of the increased infectivity was practically the same as observed in other cell lines. CONCLUSIONS: These findings are important since this is one the few cell lines described in the literature with a cytopathic effect. So it can be used for antigen preparation and serological testing for the diagnosis of specific rubella antibodies.

OBJETIVO: Descreve-se o crescimento do vírus-padrão da rubéola RA-27/3 na linhagem celular RC-IAL, com desenvolvimento de efeito citopático em resposta à infecção viral. Para este propósito, o vírus-padrão foi titulado simultaneamente nas linhagens celulares Vero, SIRC e RK13. MÉTODOS: O vírus-padrão da rubéola RA-27/3 foi inoculado na linhagem celular RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz). Placas contendo 1,5x10(5) células/ml foram inoculadas com 0,1 ml do vírus contendo 1x10(4) DICT50/0,1 ml. O efeito citopático correspondente a 25% foi observado após 48 h e 100% após 96 h. Os resultados obtidos foram comparados com o crescimento do vírus nas linhagens celulares SIRC, Vero e RK13. O vírus da rubéola na linhagem celular RC-IAL foi detectado por imuno-histoquímica. RESULTADOS: As células inoculadas com o vírus da rubéola apresentaram efeito citopático nas primeiras 48h. As células apresentaram aspecto arredondado, com formação de alguns prolongamentos citoplasmáticos e sincícios, produzindo células multinucleadas. A curva do crescimento da infectividade do vírus foi praticamente a mesma que a observada nas outras linhagens celulares. CONCLUSÃO: Os resultados obtidos mostram que a linhagem celular RC-IAL é um ótimo substrato para crescimento do vírus da rubéola, pois poucas linhagens celulares descritas na literatura apresentam efeito citopático considerável e podem ser utilizadas para preparação de antígenos e nos testes de diagnóstico sorológico para o vírus da rubéola.

OBJECTIVE: The rapid growth of the rubella virus in RC-IAL² with development of cytopathic effect, in response to rubella virus infection, is described. For purposes of comparison, the rubella virus RA-27/3 strain was titered simultaneously in the RC-IAL, Vero, SIRC and RK13 cell lines. METHODS: Rubella virus RA-27/3 strain are inoculated in the RC-IAL cell line (rabbit Kidney, Institute Adolfo Lutz). Plates containing 1.5x10(5) cells/ml of RC-IAL line were inoculated with 0.1ml s RA-27/3 strain virus containing 1x 10(4)TCID50/0.1ml. A 25% cytopathic effect was observed after 48 hours and 100% after 96 hours. The results obtained were compared to those observed with the SIRC, Vero and RK13 cell lines. Rubella virus was detected by immunohistochemistry. RESULTS: With the results, it was possible to conclude that the RC-IAL cell line is a very good substrate for culturing rubella virus. The cells inoculated with rubella virus were examined by phase contrast microscopy and showed the characteristic rounded, bipolar and multipolar cells. The CPE in RC-IAL was observed in the first 48 hours and the curve of the increased infectivity was practically the same as observed in other cell lines. CONCLUSIONS: These findings are important since this is one the few cell lines described in the literature with a cytopathic effect. So it can be used for antigen preparation and serological testing for the diagnosis of specific rubella antibodies.

A sensibilidade de uma linhagem celular diplóide e duas heteroplóides, para a detecção de citotoxicidade através do método de difusão em camada de ágar sobre culturas celulares, foi avaliada experimentalmente com solução de ácido ascórbico em diferentes concentrações e, na prática, frente a 562 amostras de 21 diferentes materiais industriais enviados para análise na Seção de Culturas Celulares do Instituto Adolfo Lutz. A linhagem celular heteroplóide designada RC-IAL apresentou, em relação às linhagens MRC-5 e HeLa, maior sensibilidade porque revelou a presença de efeito citotóxico nas menores concentrações utilizadas (10 e 25 ug/ml) do ácido ascórbico e apresentou maior diâmetro do halo citotóxico em 15 amostras e igual diâmetro em 16 das 43 amostras (7,6%) que resultaram positivas. Nas 43 amostras positivas, a linhagem MRC-5 não revelou citotoxicidade em 3 amostras de espuma e 1 de resina acrílica. O polivinilcloreto (PVC) e o polietileno, raramente revelaram positividade, enquanto plástico, algodão e resinas acrílicas revelaram citotoxicidade ao redor de 5%. Em vista dos resultados é discutida a proposta da utilização da linhagem RC-IAL e HeLa para a continuidade das futuras análises solicitadas ao Instituto Adolfo Lutz

The sensitivity of diploid and heteroploid cell lines for detection of cytotoxicity using the agar diffusion method on cell culture, was tested with ascorbic acid solution of different concentrations. A total of 562 samples of 21 various materials were tested. The heteroploid cell line, RC-IAL, showed in relation to the MRC-5 and HeLa cell lines, greater sensitivity because it showed the presence of cytotoxic effect with the lowest concentration used (10 and 25ug/ml) of ascorbic acid and showed greater diameter of cytotoxic halo in 15 samples and equal diameter in 16 of the 43 positive samples (7.6%). Out of 43 positive samples, the MRC-5 line did not show cytotoxicity in 3 sponge samples and 1 of acrylic resin. The PVC (polyvinylchloride) and polyethylene rarely showed positivity, while, the plastic, cotton and acrylic resin demonstrated cytotoxicity in about 5% of samples. We thus suggest the use of the RC-IAL and HeLa cell lines for continuation of this type of analysis at Adolfo Lutz Institute

Os autores avaliam os linfócitos T (CD3, CD4, CD8, CD4/8) por anticorpos monoclonais e rosácea em 20 pacientes e linfócitos B por Fab' por imunofluorescência em 9 pacientes com miastenia grave. Observam elevação significante na população de linfócito B e redução nos linfócitos T totais CD3+ por rosáceas. Não foram observadas modificações nas subpopulações celulares com timectomia e corticosteróides.

A significant decline of CD3 cell detected by rosettes and a significant increased of B cell populations were observed. The total CD3+, helper CD4+ and suppressor CD8+ T-cell subsets showed no significant variation em relation to sex, age thymectomy and corticotherapy by monoclonal antibodies.